李曼：医学检验临床微生物技术中的真菌检测要点

在医学检验领域，临床微生物技术对于疾病的诊断和治疗起着至关重要的作用。其中，真菌检测作为该技术的重要组成部分，近年来随着真菌性疾病发病率的上升而备受关注。准确、快速地检测真菌，有助于及时发现和治疗真菌感染，改善患者预后。本文将详细介绍医学检验临床微生物技术中的真菌检测要点。

一、样本采集与处理

1. 样本来源：真菌检测的样本来源广泛，常见的有痰液、尿液、粪便、血液、脑脊液、皮肤及指甲刮屑、阴道分泌物等。不同部位的真菌感染需要采集相应部位的样本。例如，怀疑肺部真菌感染时，采集痰液样本；怀疑泌尿系统真菌感染，则采集尿液样本。对于深部真菌感染，如真菌性脑膜炎，脑脊液样本的采集就尤为关键。

2. 采集方法与注意事项：在采集样本时，需遵循无菌操作原则，以防止样本被污染。如采集痰液样本时，患者应先用清水漱口，然后用力咳出深部痰液，避免混入唾液；采集血液样本一般采用静脉穿刺，且通常需要采集多管，以满足不同检测项目的需求。对于皮肤及指甲刮屑样本，应选取病变边缘的组织，这样可提高真菌的检出率。采集后的样本应及时送检，若不能立即送检，需根据样本类型进行适当的保存处理。例如，血液样本可在室温下短时间保存，但不宜超过数小时；尿液样本可添加适量防腐剂后冷藏保存。

二、直接镜检

直接镜检是真菌检测的初步筛查方法，具有快速、简便的特点。将采集的样本进行处理后，置于显微镜下观察。不同类型的真菌在显微镜下具有不同的形态特征。例如，念珠菌在显微镜下可见圆形或卵圆形的芽生孢子及假菌丝；皮肤癣菌可观察到菌丝和孢子；隐球菌则呈现出具有厚荚膜的圆形酵母样细胞。直接镜检虽然不能确定真菌的具体种类，但可以快速判断样本中是否存在真菌，为后续的检测提供重要线索。如果在直接镜检中发现真菌结构，通常需要进一步进行培养和鉴定。

三、真菌培养

1. 培养基选择：真菌培养需要选择合适的培养基。常用的真菌培养基有沙保弱培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基等。沙保弱培养基对大多数真菌具有较好的生长支持作用，其营养成分相对简单，有利于真菌生长和形态观察。对于一些特殊的真菌，可能需要添加特定的营养物质或抑制剂的培养基。例如，分离隐球菌时，可在培养基中添加咖啡酸，促进隐球菌产生黑色素，便于鉴定。

2. 培养条件：真菌培养的条件因真菌种类而异。一般来说，大多数真菌在 25 - 28℃的环境中生长良好，但某些深部致病真菌，如念珠菌、隐球菌等，在 35 - 37℃也能生长。培养时间通常较长，一般需要 3 - 7 天甚至更久。在培养过程中，需要定期观察培养基上是否有菌落生长，并记录菌落的形态、颜色、质地等特征。真菌菌落的形态多样，有的呈绒毛状、有的呈粉末状、有的则呈酵母样。这些特征有助于初步判断真菌的种类，例如，曲霉菌的菌落通常呈绒毛状，颜色多样，可从绿色到黑色；念珠菌的菌落呈奶油色，表面光滑或稍有褶皱。

四、真菌鉴定

1. 形态学鉴定：真菌的形态学鉴定是传统且重要的鉴定方法。通过观察真菌在培养基上的菌落形态以及在显微镜下的菌丝、孢子等结构特征来确定真菌种类。例如，青霉菌具有典型的帚状分生孢子梗，这是其区别于其他真菌的重要形态特征。此外，还可以通过一些特殊的染色方法，如革兰氏染色、乳酸酚棉蓝染色等，增强真菌结构的辨识度，更清晰地观察真菌的形态细节。

2. 生化鉴定：生化鉴定是利用真菌对不同营养物质的代谢特性来进行鉴定。例如，通过检测真菌对糖类的发酵和同化能力、对氮源的利用情况等生化反应结果，与已知真菌的生化特征进行比对，从而确定真菌种类。不同真菌对糖类的利用能力不同，如念珠菌能发酵葡萄糖、麦芽糖等，而新型隐球菌则不能发酵这些糖类。生化鉴定方法相对较为繁琐，但在一些情况下能提供重要的鉴定依据，尤其是对于形态学特征相似的真菌鉴别。

3. 分子生物学鉴定：随着分子生物学技术的发展，其在真菌鉴定中的应用越来越广泛。聚合酶链反应（PCR）技术可扩增真菌特异性基因片段，如核糖体 DNA 内转录间隔区（ITS）等，然后通过对扩增产物进行测序，并与基因数据库中的序列进行比对，从而准确鉴定真菌种类。这种方法具有快速、准确、灵敏度高的优点，尤其适用于一些难以通过传统形态学和生化鉴定方法确定的真菌，以及混合感染中真菌的鉴定。

五、药敏试验

对于真菌检测，药敏试验有助于指导临床合理选用抗真菌药物。目前常用的真菌药敏试验方法有纸片扩散法、微量肉汤稀释法等。纸片扩散法是将含有不同抗真菌药物的纸片贴在接种了待测真菌的培养基上，培养后根据抑菌圈的大小判断真菌对药物的敏感性。微量肉汤稀释法则是在一系列含有不同浓度抗真菌药物的微量肉汤管中接种待测真菌，通过观察真菌生长情况确定最低抑菌浓度（MIC）。不同的真菌对各种抗真菌药物的敏感性不同，例如，念珠菌对氟康唑等唑类抗真菌药物较为敏感，但部分念珠菌可能出现耐药；曲霉菌对伏立康唑等药物有较好的敏感性。药敏试验结果能够为临床医生制定个性化的抗真菌治疗方案提供重要参考，提高治疗效果，减少耐药真菌的产生。

医学检验临床微生物技术中的真菌检测是一个系统且严谨的过程，从样本采集到最终的鉴定和药敏试验，每一个环节都有其要点和关键之处。准确掌握这些要点，能够提高真菌检测的准确性和效率，为临床真菌感染的诊断、治疗和预防提供有力的支持，保障患者的健康。（西峡县中医院 检验科 李曼）

来源：大河报健康科普 编辑：郭莉培